利用薄膜挤压法制备支撑脂双层膜

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.10.011

中国组织工程研究 ›› 2017, Vol. 21 ›› Issue (10): 1539-1545.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2017.10.011

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利用薄膜挤压法制备支撑脂双层膜

贾晋，凌颖琛，方颖

华南理工大学生物科学与工程学院，广东省广州市 510006

收稿日期:2017-01-27 出版日期:2017-04-08 发布日期:2017-05-08
通讯作者: 方颖，副教授，硕士生导师，主要从事细胞分子生物力学方面的研究。华南理工大学生物科学与工程学院，广东省广州市 510006
作者简介:贾晋，男，1989年生，山西省太原市人，汉族，2016年华南理工大学毕业，硕士，主要从事细胞分子生物力学方面的研究。
基金资助:
国家自然科学基金(11672109，11272125，11432006)

Preparation of supported lipid bilayer membranes by thin film extrusion

Jia Jin, Ling Ying-chen, Fang Ying

School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, Guangdong Province, China

Received:2017-01-27 Online:2017-04-08 Published:2017-05-08
Contact: Fang Ying, Associate professor, Master’s supervisor, School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, Guangdong Province, China
About author:Jia Jin, Master, School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, Guangdong Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 11672109, 11272125, 11432006

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
支撑脂双层膜：是将脂双层膜固定在固体基底而形成的人工膜模型，与自由态的磷脂膜相比，支撑脂双层膜具有更强的稳定性和更长的寿命，在生物膜微观结构，细胞信号传导以及生物膜传感器等相关研究方面得到广泛应用。
荧光漂白恢复：是一种可检测组织膜或细胞膜扩散动力学的方法，此技术可定量测量被荧光标记的薄膜或细胞的二维侧向扩散。原理为利用高强度激光将某一特定区域内荧光分子不可逆淬灭后，周围被荧光标记的脂质分子或蛋白分子由于布朗运动会替换被淬灭的分子，最终漂白区域的荧光强度会恢复到原有水平，扩散能力的大小可由扩散系数计算。

背景：人工支撑脂双层膜是最接近细胞膜的体外仿生模型，构建结构与功能均类似于真实细胞膜的脂双层膜具有十分重要的意义。
目的：探索表面均匀且流动性高的支撑脂双层膜的最佳制备条件并检测指标。
方法：采用薄膜挤压法，分别以孔径为0.1，0.2 μm的滤膜对脂质体分子过滤10次，保留未过滤样品作为对照组，通过原子力显微镜对其表面粗糙程度进行检测，探讨制备均匀程度较高的脂双层膜所需滤膜的最佳孔径。将160 μL卵磷脂(10 g/L)分别与5，10，25 μL荧光磷脂(1 g/L)进行混合，通过荧光漂白恢复技术对脂双层膜的流动性进行检测，探讨卵磷脂与荧光磷脂的最适比例。
结果与结论：原子力显微镜实验结果显示，经过孔径为0.1 μm滤膜过滤所得的脂双层膜表面均匀程度最高(P < 0.01)，其表面均方根粗糙度为(0.432±0.181) nm，当滤膜孔径大于0.1 μm时，脂双层膜表面均匀程度差且存在较多的未铺展开脂质体囊泡。荧光漂白恢复实验结果显示，采用孔径为0.1 μm滤膜过滤的脂双层膜荧光恢复程度最高，当卵磷脂(10 g/L)与荧光磷脂(1 g/L)体积比为160∶10时，采用孔径为0.1 μm滤膜过滤的脂双层膜荧光恢复程度达到90%，且扩散系数大于1 μm²/s，符合优质脂双层膜的标准。实验提示利用薄膜挤压法制备脂双层膜时，卵磷脂与荧光磷脂的最适比例以及最佳滤膜孔径。

ORCID: 0000-0002-1901-1565(贾晋)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

关键词: 生物材料, 材料相容性, 卵磷脂, 荧光磷脂, 支撑脂双层膜, 薄膜挤压法, 荧光漂白恢复, 原子力显微镜, 均匀性, 流动性, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: The artificial supported lipid bilayer membrane is the most similar in vitro biomimetic model of the cell membrane. The artificial high-quality lipid bilayer membrane will provide a critical tool for the study of the microstructure of biological membranes, cell signal transduction, biofilm sensors and drug carriers.
OBJECTIVE: To explore the optimal preparation conditions of the lipid bilayer membrane with uniform surface and high mobility and its detection indexes.
METHODS: By thin film extrusion, liposomes were filtrated 10 times through the filter membrane with the pore diameter of 0.1 and 0.2 μm respectively, with the unfiltered sample as control. The root mean squared roughness of lipid bilayer membrane was detected by atomic force microscopy to explore the optimal pore diameter of the filter membrane for preparation of the lipid bilayer membrane with high uniformity. 160 μL egg-PC (10 g/L) and 5, 10 or 25 μL NBD-PC were mixed separately. The mobility of lipid bilayer membrane was detected by fluorescence recovery after photobleaching (FRAP) to explore the optimal proportion of egg-PC and NBD-PC.
RESULTS AND CONCLUSION: The results of atomic force microscopy showed that the lipid bilayer membrane through the 0.1 μm filter membrane had the highest degree of uniformity (P < 0.01), with the root mean squared roughness of (0.432±0.181) nm. By using the filter membrane whose pore diameter was greater than 0.1 μm, the surface uniformity of the lipid bilayer membrane was poor and there were more liposome vesicles on the surface. The FRAP results showed that the lipid bilayer membrane through the 0.1 μm filter membrane had a higher degree of fluorescence recovery. When 160 μL egg-PC (10 g/L) and 10 μL NBD-PC were mixed and filtrated through the 0.1 μm filter membrane, the degree of fluorescence recovery of the lipid bilayer membrane reached 90% and the diffusion coefficient was greater than 1 μm²/s which met the standard of high-quality lipid bilayer membrane. These results suggested the optimum ratio of egg-PC to NBD-PC and the optimum filter membrane pore size for preparation of the lipid bilayer membrane by thin film extrusion.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

Key words: Tissue Engineering, Phospholipases, Microscopy, Atomic Force

中图分类号:

R318

贾晋，凌颖琛，方颖. 利用薄膜挤压法制备支撑脂双层膜[J]. 中国组织工程研究, 2017, 21(10): 1539-1545.

Jia Jin, Ling Ying-chen, Fang Ying. Preparation of supported lipid bilayer membranes by thin film extrusion[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2017, 21(10): 1539-1545.

图/表（结果） 5

2.1 玻璃载玻片的表征实验中所使用的玻璃载玻片均在100 ℃的Piranha洗液中浸泡60 min以上，通过此处理方法，不仅有效地去除了载玻片表面的有机物质，同时使载玻片表面发生羟基化，亲水性增强，有利于脂质体在其表面扩散形成均匀的脂双层膜。用AFM对玻璃载玻片的表面形貌进行观测，结果如图1所示，经Piranha洗液处理过的载玻片表面均方根粗糙度(root mean squared roughness， RMSR)为(0.026 8±0.000 1) nm。未经Piranha洗液处理玻璃载玻片的RMSR为(0.028 2±0.000 2) nm，以上结果说明Piranha洗液的处理并未明显增加玻璃载玻片的粗糙程度。

2.2 原子力显微镜检测脂质体囊泡的状态实验使用不同孔径的滤膜来探究采用薄膜挤压法制备的脂质体囊泡的大小与分布，如图2A所示，对应囊泡的平均直径数值如图2B1所示。从图2A中可直观看出，采用薄膜挤压法过滤可有效减少大囊泡的出现，同时图2A结果表明，放置10 d后的脂质体半径明显增大。从图2B1中可看出过滤有效缩小了脂质体囊泡的尺寸，且采用0.1 μm滤膜过滤所形成的脂质体囊泡平均直径接近100 nm，极显著小于其他2组(P < 0.01)。由文献[21]报道，当脂质体囊泡直径小于150 nm时，所形成的脂双层膜更加均匀。图2B2为不同制备条件下，直径大于 150 nm的脂质体囊泡数，从图中可看出未过滤与采用孔径为0.2 μm滤膜过滤所得的脂质体囊泡尚有较多直径大于150 nm，极显著地高于采用孔径为0.1 μm滤膜过滤所得样品(P < 0.01)。上述结果表明，采用0.1 μm滤膜进行薄膜挤压法制备的脂质体囊泡更适合后续脂双层膜的制备。

2.3 原子力显微镜检测脂双层膜的形态为了观测不同制备条件下脂双层膜的表面形貌，实验采用原子力显微镜对脂双层膜进行扫描，结果如图3。

从图3A1中可以观察出未经过滤的脂质体在玻璃载玻片上所形成的脂双层膜表面尚有较多未铺展开的脂质体囊泡，图3A2未铺展开的脂质体囊泡较少，效果较佳，从图3A3中可看出经过孔径为0.1 μm滤膜过滤的脂质体在玻璃载玻片上形成的脂双层膜表面最为光滑，残存脂质体囊泡最少且尺寸最小，图3A4表明放置10 d的脂质体已不适于后续实验。图3B为不同条件下脂双层膜的均方根粗糙度，通过对比采用同样滤膜孔径过滤且未孵育样品的RMSR，发现未孵育样品的RMSR均大于孵育30 min的脂双层膜，其中采用0.1 μm滤膜过滤且未孵育样品的RMSR为(1.38±0.25)nm，这证明了孵育过程对脂质体在载玻片表面的铺展过程具有重要意义。

据以往研究显示，均匀脂双层膜的均方根粗糙度约为0.5 nm，实验中采用0.1 μm滤膜过滤且孵育30 min条件下制备所得的脂双层膜的RMSR为(0.423±0.181)nm^[19]，符合要求，且极显著小于其他3组(P < 0.01)。综上所述，采用0.1 μm滤膜过滤且孵育30 min条件下制备所得的脂双层膜在表面结构上更加接近生理细胞膜。

2.4 脂双层膜荧光均匀程度变化为了检测不同制备条件下脂双层膜表面荧光分子的均匀程度，采用薄膜挤压法，分别以孔径为0.1 μm与0.2 μm的滤膜对脂质体分子过滤10次，保留未过滤样品作为对照，同时将160 μL egg-PC(10g/L)分别与5，10，25 μL NBD-PC(1 g/L)进行混合，共产生9组不同制备条件的脂质体。对9组样品制备的脂双层膜各进行9点取样，在每组样品表面相同位置选取9个直径为30 μm的圆作为观察区域，得9个取样区域的平均荧光强度，对其进行方差分析。结果表明，egg-PC与NBD-PC的配比和滤膜孔径均对脂双层膜的荧光均匀程度产生显著影响，前者F=1 842.38，P=1.48×10^-62；后者F=264.21，P=6.91×10^-34；且存在二因素的交互作用(P=1.24×10^-39)。

从表1中可看出，NBD-PC的含量与挤压法中所采用滤膜孔径的大小均对9组样品荧光强度产生较大影响。滤膜孔径为0.1 μm的3组样品的标准偏差值均显著性小于同一配比下的其他2组(P < 0.05)。以上结果与之前采用原子力显微镜的检测结果一致，表明采用0.1 μm滤膜进行薄膜挤压法制备脂质体能够形成更加均匀的脂双层膜。

2.5 脂双层膜荧光漂白恢复情况为了检测不同制备条件下脂双层膜的流动性，实验通过荧光漂白恢复技术对脂双层膜进行检测，漂白区域直径为30 μm，所得结果如图4A。从图4A中可见，滤膜孔径对荧光恢复程度具有较大影响，未过滤对照组与采用孔径为0.2 μm滤膜过滤实验组的荧光恢复程度均小于90%。从图4A中可见，采用孔径为 0.1 μm滤膜过滤的实验组，egg-PC与NBD-PC体积比为160∶10的样品，荧光恢复程度达到初始荧光强度的90%以上，荧光恢复曲线如图4B，经过计算得其扩散系数为(1.053±0.042) μm²/s，满足扩散系数大于1 μm²/s，符合优质脂双层膜的标准，表明此条件制备的脂双层膜具有良好的流动性。

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引言

英国科学家Bangham等^[1]于1965年发现将磷脂分子放入水中后，可自发形成一种类似细胞膜的双分子层囊泡，并将其称作脂质体。此后，对脂质体的研究日渐成为生命健康与膜工程领域的热点，并逐步发展到临床应用方面。研究发现脂质体不仅可以作为药物载体^[2]，同时由于其与细胞膜结构的相似性，可作为细胞膜模型进行生理病理方面的研究^[3-7]。因此，制备接近生理细胞膜的脂双层膜的工艺一直备受关注。

脂双层膜制备的成功与否与脂质体息息相关。目前脂质体的制备可分为两相分散法、表面活性剂法以及机械分散法3大类。两相分散法是将脂质分子溶解在有机溶剂后，将溶剂蒸发从而得到脂质体，但常实验中所使用的有机溶剂较难去除，且脂质分子在部分溶剂中溶解性差，影响其均一性^[8-9]。表面活性剂法是将脂质分子与脱氧胆酸盐和胆酸盐等活性剂混合，通过离心、凝胶或透析方法，最终获得中等尺度的单层脂质体^[10-11]，但制备速度较慢效率较低。机械分散法是将脂质分子干燥成膜后，加入水溶介质溶解，并采用机械方法(超声震荡或摇晃等)方法获取的脂质体均一性较佳且效率较高。

实验采用机械分散法中的薄膜挤压法，即通过挤压使脂质体穿过小孔径滤膜，在剪切力作用下脂质体发生形变后破裂，之后重组成更小尺寸的脂质体，最终到达滤膜外侧。这一方法能够很好的解决脂质体的均一性和制备效率低下的问题。但在薄膜挤压法中，何种滤膜孔径有助于后续脂双层膜的制备尚未有清晰的报道^[8]。

脂双层膜是否接近生理细胞膜，可通过检测其表面均匀程度与流动性进行鉴定。脂质体成分中大多含有不饱和酰基链，易发生氧化与水解反应^[12]，从而导致颗粒聚集、流动性降低等后果，影响品质^[13]。

目前检验所制备的脂双层是否具有良好的细胞膜特性，研究者常根据自己的研究目标和喜好有不同的选择。研究材料表面特征的一般采用原子力显微镜(atomic force microscope，AFM)，由于其具有纳米级分辨率在脂双层膜表面均匀程度检测方面已得到广泛应用^[14-16]。而研究单细胞生物功能的(例如信号转导及免疫突触形成等)多采用共聚焦显微镜，因为制备生物膜是否具备良好流动性至关重要^{[3-11，17-19]}。

荧光漂白恢复技术(fluorescence recovery after photobleaching，FRAP)可利用荧光探针通过恢复曲线定量分析脂双层膜上分子迁移的扩散系数^[6-7，20]，从而反映出脂双层膜流动性的强弱。可以看出，两种测试工具各有利弊，原子力显微镜能测量脂双层的均匀性但不能获得材料的流动性，而激光共聚焦显微镜能反映材料的流动性但不能反映其均匀性。但目前研究大多采用一种方法来检测，并不能很好的反映脂双层膜的品质。

为了探索表面均匀且流动性高的支撑脂双层膜的最佳制备条件并进行鉴定，实验采用薄膜挤压法制备脂质体，试图从卵磷脂与荧光磷脂的配比以及挤压法所用滤膜孔径等方面着手，采用原子力显微镜并结合荧光漂白恢复技术，通过测定脂双层膜的表面形貌、均方根粗糙度、荧光恢复程度与扩散系数等表征参数，分析其表面均匀程度及流动性，最终获得制备脂双层膜的最适条件。实验为脂双层膜作为细胞膜模型在生理病理方面，尤其是免疫细胞的体外研究提供了关键性工具。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

材料方法

1.1 设计脂双层膜的制备与其性能检测实验。

1.2 时间及地点于2015年3月至2016年5月在华南理工大学生物科学与工程学院完成。

1.3 材料卵磷脂及荧光卵磷脂均购自美国Avanti Polar Lipids公司。

1.4 实验方法

1.4.1 玻璃仪器的前处理将玻璃载玻片(美国Thermo Fisher Scientific 公司)放入Piranha洗液(体积分数70%浓硫酸(广州市东红化工厂)和体积分数30%双氧水(天津市大茂化学试剂厂)中，在100 ℃下蒸60 min以上，用超纯水冲洗3次，随后用氮气(成都金凤液氮容器有限公司)将载玻片吹干并放入干燥器中待用。用氯仿(天津市大茂化学试剂厂)清洗移液管、锥形瓶以及玻璃注射器，并用氮气吹干。

1.4.2 脂质体的制备配制TSA缓冲液(25 mmol/L Tris，北京市普博欣生物科技有限责任公司)，150 mmol/L NaCl(天津市大茂化学试剂厂)，体积分数0.02% NaN3(北京市普博欣生物科技有限责任公司)，pH 7.0，用孔径为 0.22 μm的滤膜过滤，之后放入51 ℃的水浴中待用。在暗室中，将160 μL 卵磷脂egg-PC(10 g/L)分别与5，10， 25 μL的荧光磷脂NBD-PC(1 g/L)混合于锡纸包裹的锥形瓶内，之后将锥形瓶置于51 ℃的水浴环境中用氮气将脂质体分子轻轻吹干成膜。用石蜡膜密封瓶口，锡纸包裹，真空干燥3 h。将锥形瓶取出并放置于51 ℃的水浴中，加入5.37 mL经预热的TSA缓冲液，吹入氮气并封口，之后置于51 ℃的摇床中1 h，设置转速为150 r/min。在51 ℃的无光环境中，使用挤压机分别采用孔径为0.1 μm和0.2 μm的滤膜对脂质体进行挤压过滤，每组过滤10次，同时保留一份未经过滤的样品作为对照组。所得样品吹入氮气，密封，用锡纸包裹后保存于4 ℃的冰箱中。

1.4.3 AFM实验中脂双层膜样品准备实验中所使用的脂质体均为160 μL egg-PC(10 g/L)与10 μL NBD-PC (1 g/L)混合制备。提前将脂质体样品从冰箱中取出，室温静置20 min。将10 μL的脂质体溶液滴加到玻璃载玻片表面，用氮气将样品吹干。

1.4.4 AFM检测脂双层膜采用轻敲模式进行检测，设置频率为1.5 Hz，积分增益为100，比例增益为100，分辨率为256×256，比例(高∶宽)为1∶1，采用Imager AFM图像处理软件分析所得数据。

1.4.5 FRAP实验脂双层膜样品准备将脂质体从冰箱取出，室温放置20 min。在暗室中，滴加10 μL脂质体溶液到载玻片中心处，避光孵育30 min，保持湿润环境。用TSA缓冲液轻微地冲洗载玻片，将其表面游离的脂质体分子冲洗干净，盖上盖玻片，完成样品制备。

1.4.6 FRAP实验条件与方法实验在22 ℃环境中进行，采用莱卡TCS-SP8共聚焦显微镜(德国莱卡公司)，选择PMT作为检测器，设置检测激光强度为5%，漂白激光强度为100%，像素为256×256，选择FRAP 增强模式，孔径设置为2.3，扫描速度为200，荧光漂白恢复区域直径为 30 μm，物镜为40倍物镜。漂白前扫描5幅(1幅约为0.655 s)以获取初始荧光强度。荧光恢复过程设置300 s，以保证漂白区域恢复完全最终达到平衡。扫描模式设置为xyt连续扫描，序列扫描设置为顺序扫描，以防止多通道设置的串扰。氩激光功率设置为80%-100%，设置激发光为488 nm，选择Zoom In模式，以减少漂白过程对非漂白区域的影响。

1.5 主要观察指标 ①脂双层膜的表面形貌，不同制备条件下脂质体囊泡尺寸及脂双层膜的均方根粗糙度，采用原子力显微镜(本原纳米仪器有限公司)；②脂双层膜初始荧光均匀程度，由9点取样平均荧光强度的标准偏差值体现；③荧光漂白恢复实验，脂双层膜漂白区域的荧光恢复程度与扩散系数D，扩散系数的计算公式为D≈0.25r02/t_1/2，其中r0为漂白区域圆的半径，t_1/2为达到最大恢复程度一半所需要的时间^[6-7]。

1.6 统计学分析采用Excel 2016软件进行数据分析，计量资料用x(_)±s表示，多组间数据差异的比较采用单因素方差分析和或多因素方差分析，组间数据两两比较采用LSD检验，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

讨论

生物膜是生命细胞的重要组成部分，它将细胞区域化并为细胞内的生化反应提供了结构保障^[21-25]。制备均匀程度高且流动性好的人工生物膜材料就成为生物化学家和材料学家的关注焦点。

在生物膜的相关研究中，支撑脂双层膜由于其具有与细胞膜类似的结构及良好的稳定性，迅速成为研究的前沿。目前支撑脂双层膜比较广泛的制备方法主要是囊泡融合法^[26]。囊泡融合法中最关键的一步是机械分散法制备脂质体囊泡，即通过压力将脂质体穿过小孔径滤膜，经过破裂与重组后形成小尺寸的脂质体囊泡^{[3， 27-29]}，但如何选择最适滤膜孔径尚不明晰。

为了探索在挤压法中不同滤膜孔径对脂双层膜形成的影响，实验采用薄膜挤压法通过0.2与0.1 μm的滤膜将脂质体过滤10次，同时保留未过滤样品作为对照。过滤得到单层且小粒径脂质体囊泡，将其铺展到玻璃载玻片基底上形成脂双层膜。同时，实验采用3种配比来探究egg-PC与NBD-PC的最适比例。通过AFM检测脂双层膜表面结构以及FRAP检测脂双层膜的流动性，最终确定了当egg-PC与NBD-PC体积比为160∶10，采用0.1 μm滤膜过滤且孵育30min制备的脂双层膜更加接近生理细胞膜的结构与功能。

在薄膜挤压法制备脂质体囊泡时，采用不同孔径的滤膜对脂质体进行过滤，可有效减少脂质体囊泡粒径。通过孔径为0.1 μm滤膜制得的脂质体囊泡粒径基本小于150 nm，平均直径略大于100 nm，这是由于脂质体膜具有一定的弹性和流动性，所以略大于滤膜孔径的脂质体囊泡仍能通过滤膜。

实验结果证明采用孔径为0.1 μm滤膜对脂质体过滤10次后，可制得囊泡融合法中所需的小粒径脂质体囊泡，同时也证明放置时间过长脂质体会重新融合成大粒径囊泡。经过Piranha洗液处理的玻璃载玻片表面平整且亲水性增强，利于脂质体囊泡的沉积。当囊泡在玻璃载玻片基底上沉积时，会发生歪曲形变直至破裂成膜。原子力显微镜的表面形貌图表示当粒径大于150 nm的脂质体囊泡较多时，所形成的磷脂膜粗糙程度较大，经过孔径为0.1 μm滤膜过滤的脂质体形成的磷脂膜表面粗糙度为(0.423±0.181)nm，形成连续的脂双层膜，与文献报道一致^[30]。

进一步采用共聚焦显微镜检测采用不同配比egg-PC与NBD-PC的磷脂膜，通过荧光均匀程度分析可得出与原子力显微镜实验一致的结论，经过孔径为0.1 μm滤膜过滤的磷脂膜表面均匀程度最高，不同区域荧光强度的标准偏差值最小。在进行荧光观测时，由于激光的作用荧光分子会发生淬灭，荧光磷脂含量不同，荧光分子淬灭程度也不同。当egg-PC与NBD-PC体积比为160∶5时，荧光分子含量较小，相同观测条件下荧光强度弱，影响检测；当egg-PC与NBD-PC体积比为160∶25时，观测激光对荧光分子的淬灭作用最强，荧光值下降较快，不适于时间较长的观测实验。实验结果表明，经过孔径为0.1 μm滤膜过滤的脂双层膜荧光恢复程度最高，结合AFM实验结果，实验发现当磷脂膜粗糙度较低时，表面较为均匀，流动性较高，这或许是由于粗糙度过大可能会形成脂质体囊泡聚集，不利于流动，这也在以往的研究中有所证实^[3^，^17-19^，^31]。同时，只有egg-PC与NBD-PC体积比为160∶10时的样品荧光恢复程度达到初始荧光强度的90%以上且扩散系数大于1 μm²/s，达到优质脂双层膜的要求^[6^，³²^-42^]。

实验利用薄膜挤压法制备出粒径约为100 nm的脂质体囊泡，采用囊泡融合法在玻璃载玻片表面形成表面均匀且流动性高的脂双层膜，将为生物膜微观结构，细胞信号传导，生物膜传感器以及药物载体等相关研究提供关键性工具。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

利用薄膜挤压法制备支撑脂双层膜

Preparation of supported lipid bilayer membranes by thin film extrusion

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